一、概述

    藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能*去除的有機溶劑。

    按有機溶劑的毒性和對環(huán)境的危害，ICH將有機溶劑分為避免使用、限制使用、低毒和毒性依據(jù)尚不足四種情況。

    因殘留溶劑會影響產(chǎn)品的安全性，故需對其進行研究。

二、殘留溶劑檢查方法的選擇

    殘留溶劑的測定一般采用氣相色譜法，使用毛細管色譜柱-頂空進樣系統(tǒng)，當然也可以使用普通填充柱，溶液直接進樣方法。

    對不宜采用氣相色譜法測定的含氮堿性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可采用其它方法，如離子色譜法等。

    測定殘留溶劑應從以下幾個方面考慮：確定被測的有機溶劑、選擇合適的色譜柱、制備供試品溶液和對照品溶液、選擇合適的進樣方法和滿足檢測靈敏度要求的檢測器，下面分別進行介紹：

1、確定被測的有機溶劑

    根據(jù)制備工藝確定被測有機溶劑的范圍。通常應對制備工藝過程中使用的二類以上溶劑和重結(jié)晶用溶劑，以及根據(jù)工藝特點要求的其它溶劑進行殘留量的研究。建議對合成zui后三步使用的三類溶劑也進行研究，這樣能更好地對未知峰進行歸屬；對制劑過程中使用的有機溶劑也建議考察其殘留情況，特別是緩、控釋微丸包衣過程使用的有機溶劑更應引起注意。

    殘留溶劑的限度要求同ICH的規(guī)定。

2、選擇合適的色譜柱

    按照相似相溶的原理選擇色譜柱。毛細管柱有極性柱、非極性柱、弱極性柱和中等極性柱。填充柱有高分子多孔小球或涂漬適宜固定液的填充柱。

    測定含氮的堿性有機溶劑時，由于普通氣相色譜儀的不銹鋼管路、進樣器襯管等對有機胺等含氮的堿性化合物具有較強的吸附作用，致使其檢出的靈敏度降低。通常采用弱極性色譜柱或經(jīng)堿處理過的色譜柱分析含氮的堿性有機溶劑，如果采用胺分析柱進行分析，則效果更好。

3、供試品和對照品的制備

    頂空進樣方法通常以水為溶劑，對于非水溶性的藥物，可采用DMF、DMSO或其他適宜溶劑。溶液直接進樣方法用水或合適的溶劑溶解樣品。

    制備供試品的溶劑的選擇應兼顧供試品和被測有機溶劑的溶解度，且所用溶劑應不干擾被測有機溶劑的測定。水是溶劑，特別是頂空進樣系統(tǒng)。因為水中不含有機溶劑，故干擾較少，且在FID檢測器上，以水為溶劑時，各殘留溶劑的靈敏度zui高。當藥物不溶于水時，可加入適當?shù)乃峄驂A以增加藥物的溶解度，選用不揮發(fā)的酸或堿。以DMSO等為溶劑時，可加入一定量的水以增加檢測的靈敏度，或用鹽析的方法增加靈敏度。測定含氮的堿性溶劑時，供試品溶液應不呈酸性，以免被測物與酸反應后不易汽化。

    對照品的制備方法應與供試品的制備方法相同。在申報資料中發(fā)現(xiàn)對照品（溶液）為直接進樣，供試品則為固體直接頂空進樣，供試品和對照品不但制備方法不同，而且進樣方法和進樣量也不同，無法進行比較。提請申報單位注意。

4、供試品溶液和對照品溶液濃度的確定

    配制供試品溶液的濃度應滿足定量測定的需要，一般供試品取樣量在0.1～1g之間。限度檢查時對照品溶液的濃度可按規(guī)定的限度配制，定量測定時按實際殘留量配制，濃度相差以不超過2倍為宜。

5、檢測器的選擇

    一般選用FID檢測器，對含鹵素的有機溶劑如氯仿等，采用ECD檢測器可得到更高的靈敏度。

    通常可根據(jù)藥物溶劑的殘留情況選擇合適的檢查方法。當需要檢查的有機溶劑數(shù)量不多，且極性差異較小時，可選擇毛細管色譜柱-頂空進樣-等溫法。當需要檢查的有機溶劑數(shù)量較多，且極性、沸點差異較大時，可選擇毛細管色譜柱-頂空進樣-程序升溫法；也可選擇填充柱或適宜極性的毛細管柱直接進樣法。

限度檢查（一類、部分二類溶劑）時采用內(nèi)標法或外標法；定量測定（含量超過0.1%的二類或需要定量控制的三類溶劑）時采用內(nèi)標法或標準加入法。

    頂空進樣法還要對頂空溫度和頂空時間進行選擇。

    頂空溫度應根據(jù)溶解供試品溶劑的特性及供試品中殘留溶劑的沸點選擇。以水為溶劑及測定低沸點殘留溶劑時，頂空溫度不宜超過85℃；測定沸點較高的殘留溶劑時，通常選擇較高的頂空溫度；但此時應兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物干擾測定結(jié)果。以DMSO為溶劑時，頂空溫度不宜超過115℃。例如，在申報資料中發(fā)現(xiàn)，以水為溶劑，頂空溫度為100℃，柱溫60℃，結(jié)果高濃度的乙腈比低濃度的二氯甲烷的峰面積還小，原因是頂空溫度太高，大量的水被蒸發(fā)（或濃度被稀釋），隨著水蒸汽的凝結(jié)，在水中溶解度大的乙腈的靈敏度下降，產(chǎn)生了與事實不符的實驗結(jié)果。

    頂空時間是要確保供試品溶液的氣-液兩相達到平衡，一般通過測定頂空時間與頂空氣體濃度的濃度—時間曲線來確定。頂空時間不宜過長，一般為30～45分鐘，如果超過60min，可能引起頂空瓶的氣密性變差,導致定量的準確性降低。如果平衡時間選擇10分鐘，就不能保證氣-液兩相達到平衡。

注意對照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。

    甲酰胺、2－甲氧基乙醇、2－乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不適宜用頂空法測定。

三、殘留溶劑檢查方法的驗證

1、系統(tǒng)適用性試驗

    柱效：用被測物的色譜峰計算，填充柱法的理論板數(shù)應大于1000，毛細管色譜柱的理論板數(shù)應大于5000。

    分離度：色譜圖中被測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應大于1.5。

    重復性：以內(nèi)標法測定時，對照品溶液連續(xù)進樣5次，所得被測物與內(nèi)標物峰面積之比的相對標準偏差（RSD）應不大于5%；以外標法測定時，所得被測物峰面積的相對標準偏差（RSD）應不大于10%。

2、準確度

    在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少9個測定結(jié)果。設計三個不同的濃度進行測定，計算回收率和相對標準偏差，含量測定的回收率應大于98%。

    進行回收率試驗時，由于采用頂空進樣系統(tǒng)，供試品與對照品處于不*相同的基質(zhì)中，此時應考慮氣-液平衡過程中的基質(zhì)效應。標準加入法可以消除供試品溶液基質(zhì)與對照品溶液基質(zhì)不同所致的基質(zhì)效應的影響，故通常采用標準加入法驗證定量方法的準確性。當標準加入法與其它定量方法的結(jié)果不一致時，應以標準加入法的結(jié)果為準。

    標準加入法為精密稱（量）取被測定的殘留溶劑對照品適量，配制成適當濃度的對照品溶液，取一定量精密加入到供試品溶液中，根據(jù)外標法或內(nèi)標法測定殘留留劑的含量，再扣除加入的對照品溶液的含量，即得供試液溶液中殘留溶劑的含量；或按下式計算殘留溶劑的量。Cx=ΔCx/[（Ais/Ax）-1]，式中Cx為供試品中組分X的濃度；Ax為供試品中組分X的色譜峰面積；ΔCx為所加入的已知濃度的被測組分對照品；Ais為加入對照品后組分X的色譜峰面積。

3、專屬性

    對各種殘留溶劑定位和進行混合溶劑的分離度試驗，并附代表性圖譜。

    供試品中的未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解產(chǎn)物易對殘留溶劑的測定產(chǎn)生干擾。如果未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解產(chǎn)物與被測物的保留值相同（共出峰），或熱降解產(chǎn)物與被測物的結(jié)構(gòu)相同（如甲氧基熱裂解產(chǎn)生甲醇）時，應通過試驗排除干擾。對*類干擾，通常采用在另一種極性相反的色譜柱系統(tǒng)中對相同樣品進行測定，比較不同色譜系統(tǒng)的測定結(jié)果的方法。如二者結(jié)果一致，則可以排除測定中有共出峰的干擾；如二者結(jié)果不一致，則表明測定中有共出峰的干擾。對第二類干擾，通常要通過測定已知不含該溶劑的對照樣品來加以判斷。

4、其它

    可根據(jù)是限度檢查還是定量測定選擇具體的驗證內(nèi)容。

    精密度：重復性和重現(xiàn)性，在規(guī)定范圍內(nèi)，至少9個測定結(jié)果。設計三個不同的濃度進行測定。一般保留時間的RSD<1%，峰面積的RSD<5%。

    線性：至少制備5個濃度，R=0.99。附回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。

    檢測限和定量限：檢測限為信噪比3:1或2:1時相應濃度或注入儀器的量。定量測定時需驗證定量限，其限度為信噪比10:1時相應濃度或注入儀器的量。同時說明測試的過程和結(jié)果，并附圖譜。